Приготовление твердой питательной среды агар-агар

Что такое LMEA?

Light malt extract agar (LMEA) — это один из самых распространенных видов питательной среды агар-агар, который используется для выращивания грибов, бактерий и других микроорганизмов. LMEA является наиболее простым рецептом агар-агара, который легко приготовить дома. В этом рецепте используются только три основных ингредиента — светлый экстракт солода, агар-агар и вода.

Светлый экстракт солода, который является основным компонентом LMEA, содержит большое количество питательных веществ, таких как аминокислоты, витамины и минералы. В сочетании с агар-агаром, это создает идеальную питательную среду для микроорганизмов, которые могут быстро и эффективно расти на ней. Поэтому LMEA считается одним из лучших вариантов для начинающих, так как он обеспечивает быстрый и надежный рост мицелия.

Важно отметить, что для получения оптимальных результатов необходимо соблюдать все этапы приготовления LMEA, включая стерилизацию инструментов и материалов, использование правильных пропорций и точное следование рецепту. Правильное приготовление LMEA гарантирует высокое качество питательной среды и помогает избежать возможных проблем при выращивании грибов или других микроорганизмов. В данном руководстве мы объясним как приготовить питательную среду. 

Что нам понадобится?

Для приготовления твердой питательной среды на агар-агаре вам понадобятся следующие ингредиенты и принадлежности: вода, сухой солодовый экстракт, агар-агар, чашки Петри, марлевый бинт (или бумажный фильтр), емкости для смешивания и нагревания ингредиентов, пластырь, автоклав/скороварка, инкубатор. А если вы желаете посеять споры на питательную среду в дальнейшем, то вам необходима будет еще и инокуляционная петля, либо ушные палочки которые прошли стерилизацию в скороварке/автоклаве.

Для обеспечения успешного роста мицелия на питательной среде, необходимо точно придерживаться пропорций и соблюдать все этапы приготовления, включая стерилизацию инструментов и материалов. Также важно правильно разлить питательную среду по чашкам Петри.

Шаг 1:

Как приготовить питательную среду? Чтобы приготовить питательную среду, необходимо смешать воду, агар-агар и сухой светлый солодовый экстракт (LME) в соответствующих пропорциях. 

После того как вы хорошо размешали все ингредиенты в воде, пора отправлять емкость в микроволновую печь на 5-10 минут. Обязательно помешиваем каждые 30-60 секунд до полного растворения. Важно доводит субстанцию до кипения, но не кипятить её.

По истечению 5 минут в микроволновке желательно отфильтровать субстанцию, но этого можно не делать. Для фильтрации используем марлевый бинт или бумажный фильтр.

После этого питательную среду необходимо перелить в банку, закрыть крышкой (в крышке должно быть отверстие, которое заклеено пластырем). Затем питательная среда должна быть стерилизована в скороварке вместе с чашками Петри и инокуляционной петлей или ватными палочками.

Стерилизовать в скороварке жидкие среды достаточно 40 минут, по истечению стерилизации, даем немного остыть скороварке, после чего достаем и переносим в помещение в которой будете разливать агар-агар по чашкам Петри. 

Шаг 2:

Перед началом разливки питательной среды по чашкам Петри и ее инокуляции/посева необходимо обеспечить высокую степень стерильности, чтобы избежать контаминации. Для этого можно использовать самодельный бокс для стерильных работ, сделанный из подручных материалов. Если у вас такого нет, то обеспечить стерильность будет намного сложнее. Вам надо выбрать помещении в котором вы будете проводить разливку, инокуляцию и прокварцевать помещение в течении 40-60 минут, идеально стерильного помещения все равно не будет, но шансы на контаминацию все равно уменьшатся. При использовании бактерицидной лампы соблюдайте все меры предосторожности, при неправильной эксплуатации, бактерицидная лампа может причинить вред здоровью. В данном руководстве использовался самодельный бокс для стерильных работ.

Я не смог снять процесс разливки на видео, поэтому опишу его словами. Для начала разливания питательной среды на агар-агаре ей надо дать остыть. Температура должна быть не ниже 40 градусов, иначе агар застынет, также температура агара не должна быть слишком высокой, чтобы не было лишнего конденсата в чашках Петри. Когда агар-агар остынет, откройте крышку емкости, возьмите емкость одной рукой, приоткройте чашку Петри другой рукой и налейте примерно 15-20 миллилитров питательной среды, в зависимости от диаметра чашки. Жидкость должна равномерно распределиться по дну чашки.

Как только вы налили питательную среду агар в чашку Петри, закройте ее и дайте агару застыть. Как только он полностью застынет и остынет, питательная среда будет готова для инокуляции спорами, жидким мицелием, зерновым мицелием или любым другим мицелием. У каждого типа инокуляции есть свои особенности. В этом руководстве мы рассмотрим инокуляцию спорами и споровой взвесью.

Шаг 3:

Как правильно инокулировать агарную питательную среду спорами или споровой взвесью? Это процесс кажется сложным, но на самом деле требует только одного — соблюдения стерильности.

Для посева спор на питательную среду агар необходимо использовать стерильные инокуляционные петли или ушные палочки. Если инокуляционной петли нет под рукой, можно воспользоваться другими методами для посева спор на питательную среду агар. Например, можно просто струсить немного спор на агар, постучав по бумажке, или соскрести их ножом или иголкой. Важно предварительно обработать инструменты спиртом и раскалить до красна, чтобы обеспечить его стерильность. Если у вас нет инокуляционной петли, используйте ушные палочки, но вам понадобится несколько палочек, так как вы не сможете их обработать огнем. Ниже приведены изображения самого популярного метода нанесение спор. Штриховой метод является одним из наиболее распространенным и позволяет хорошо очистить споры и выделить отдельные колонии.

Если не хотите заморачиваться со штрихами, можно просто нарисовать букву S спорами на агаре. А если есть споровая взвесь, то процесс еще проще: достаточно нагреть иголку до красна, проткнуть питательную среду и выпустить несколько капель. Либо вылить пару капель по всей площади чашки Петри.

После инокуляции питательной среды спорами или споровой взвесью, обмотайте чашку Петри по кругу омнипором или пластырем на нектарной основе и отправьте в инкубатор с температурой 28-30 градусов. Температурный режим зависит от вашей культуры. Первые признаки мицелия проявятся на 3-5 день инкубации. 

Вы также можете купить стерильную питательную среду агар и сопутствующие ингредиенты у нас в магазине. Как сделать жидкую питательную среду для мицелия читайте тут. Если вы заметили ошибку, неточность, или у вас есть вопросы, всю необходимую информацию как с нами связаться вы найдете на странице контактов.